تعیین توالی یا تکنیک توالی یابی سنگر (DNA Sequencing)روشی است که از دهه 70 توسط شرکت Applied Biosystems درجهان تجاری سازی شد که روشی برای شناسایی توالی بازهای آلی نیتروژن‌دار (A,T,C,G)موجود در ژنوم مي باشد. توالی یابی به روش sanger برگرفته از نام فردریک سنگر می باشد. این روش در حال حاضر دقیق‌ترین روش مستقیم برای تعیین جهش‌های بیماری‌زا می باشد. این روش می‌تواند حتی اضافه، حذف یا تغییر یک نوکلئوتید را هم مشخص کند. در این روش باید قطعه مورد نظر جهت توالی یابی DNA به عنوان الگویPCR مورد استفاده قرار بگیرد سپس نوکلئوتیدهای دی دئوکسی نوکلئوتید(ddNTPs) در هر نقطه ای از زنجیره در حال ساخت باعث خاتمه رشته درحال ساخت می گردد . هر یک از دی دئوکسی نوکلئوتید(ddNTPs) دارای رنگ فلوئورسنت اختصاصی می باشد و از همین طریق توالی ها شناسایی می گردند.
حداکثر طول قطعه قابل شناسایی توسط این روش حدود 1000bp میباشد. امروزه توالی‌یابی به روش NGS جایگزین توالی‌یابی به روش سنگر برای حجم بالاتر و تحلیل ژنوم برای تشخیص انواع بیماریهای ژنتیکی شده است .